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薄层色谱法的操作方法包括薄层色谱硅胶板的选用、点样、展开、显色、检视与记录五个步骤。同时,在使用过程中,经常会遇到拖尾、边缘效应、S形及波形斑点、念珠状斑点及Rf值不稳定等问题。
目前,实验室已普遍采用市售高效薄层板,以硅胶G型板最为常见,相对于自制薄层板来说分离效果更好。
由于硅胶表面的pH值约为5,比较适合于酸性和中性物质的分离,如有机酸、酚类、醛类等。碱性物质能与硅胶作用,展开时易被吸附于原点不动或出现斑点拖尾现象。在自制薄层板时可用稀碱溶液制备薄层使其变为碱性,或用碱性展开剂展开,从而得到理想的图谱。
对薄层板的质量要求:厚度均匀一致、表面平整光滑、无麻点气泡、无破损污染。自制薄层板时,要控制好铺板用的匀浆稠度,过稠则板面容易出现层纹,过稀则干后表面粗糙;使用前一般应于110℃下活化30 min,活化后置干燥器中备用。市售板在阴凉干燥处保存,可直接使用。
Rf值不稳定的各因素:
1.温湿度
温湿度不稳定。层析时室温差控制在5℃之间。其他条件相同,温度低比温度高展开慢,分离好。湿度可能主要影响薄层板的吸附能力,导致选择性( 容量因子) 的变化。湿度应根据实际情况确定,可通过反复实验进行相应的调整。一般来说,湿度较低时,分离效果较好。
2.展开剂
展开剂的极性越大,对待定化合物的洗脱能力也越大。
3.薄层厚度
板厚度变化对比移值影响明显。厚度达0.2mm时,影响较小;在0.25mm,分离效果最佳。
4.吸附剂含水量
与吸附剂的种类、使用时的加水量、风干时间、活化温度、活化时间等因素有关。
5.层析缸中蒸汽
缸中蒸汽未达饱和时,比移值不能重现。为使缸中蒸汽饱和,可以在缸内壁附上一层滤纸,让展开剂全部湿润;把展开剂放入层析缸一段时间后再放薄层板;尽可能在恒定温度下层析。
6.其他因素
展开剂的pH、展开时间、展开距离、样品浓度、点样量、薄层板所用吸附剂中的粘合剂的种类和用量等。
以上就是薄层色谱硅胶板小编的介绍,希望对大家有所帮助。