薄层色谱硅胶板之薄层色谱法标准操作流程

薄层色谱硅胶板小编给大家普及新知识，薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。

1.玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。

2.固定相或载体：最常用的有硅胶g、硅胶gf、硅胶h、硅胶hf254，其次有硅藻土、硅藻土g、氧化铝、氧化铝g、微晶纤维素、微晶纤维素f254等。其颗粒大小，一般要求直径为10-40μm。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10-15%煅石膏(caso4·2h2o在140℃烘4小时)，混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.5-0.7%)适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄层。

3.涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。

4.点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。

5.展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。

1.薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.2-0.3mm)，取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度(可通过透射光和反射光检视)。

2.点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为2-4mm，点间距离约为1.5-2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。

3.展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5-1.0cm(切勿将样点浸入展开剂中)，密封室盖，等展开至规定距离(一般为10-15cm)，取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。

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