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薄层色谱法的操作方法包括薄层色谱硅胶板的选用、点样、展开、显色、检视与记录五个步骤。同时，在使用过程中，经常会遇到拖尾、边缘效应、S形及波形斑点、念珠状斑点及Rf值不稳定等问题。
薄层板的选用：
目前，实验室已普遍采用市售高效薄层板，以硅胶G型板最为常见，相对于自制薄层板来说分离效果更好。由于硅胶表面的pH值约为5，比较适合于酸性和中性物质的分离，如有机酸、酚类、醛类等。碱性物质能与硅胶作用，展开时易被吸附于原点不动或出现斑点拖尾现象。在自制薄层板时可用稀碱溶液制备薄层使其变为碱性，或用碱性展开剂展开，从而得到理想的图谱。
对薄层板的质量要求：厚度均匀一致、表面平整光滑、无麻点气泡、无破损污染。自制薄层板时，要控制好铺板用的匀浆稠度，过稠则板面容易出现层纹，过稀则干后表面粗糙；使用前一般应于110℃下活化30 min，活化后置干燥器中备用。市售板在阴凉干燥处保存，可直接使用。
Rf值不稳定的各因素：
1.温湿度
温湿度不稳定。层析时室温差控制在5℃之间。其他条件相同，温度低比温度高展开慢，分离好。湿度可能主要影响薄层板的吸附能力，导致选择性( 容量因子) 的变化。湿度应根据实际情况确定，可通过反复实验进行相应的调整。一般来说，湿度较低时，分离效果较好。
2.展开剂
展开剂的极性越大，对待定化合物的洗脱能力也越大。
3.薄层厚度
板厚度变化对比移值影响明显。厚度达0.2mm时，影响较小；在0.25mm，分离效果最佳。
4.吸附剂含水量
与吸附剂的种类、使用时的加水量、风干时间、活化温度、活化时间等因素有关。
5.层析缸中蒸汽
缸中蒸汽未达饱和时，比移值不能重现。为使缸中蒸汽饱和，可以在缸内壁附上一层滤纸，让展开剂全部湿润；把展开剂放入层析缸一段时间后再放薄层板；尽可能在恒定温度下层析。
6.其他因素
展开剂的pH、展开时间、展开距离、样品浓度、点样量、薄层板所用吸附剂中的粘合剂的种类和用量等。
烟台维启化工产品有限公司，主要从事层析耗材的生产及销售，产品包括，柱层层析硅胶粉、薄层色谱硅胶板、薄层色谱硅胶制备板等，经过近10年的摸索，我们生产的硅胶粉无论在产能还是质量方面都一直处于国内领先水平，并且在客户中享有极高的声誉。
